乙醇脫氫酶（ADH）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1080
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：臨用前將粉劑一倒入提取液中，溶液為懸濁液，使用前需搖勻；

2. 試劑二：臨用取一支加入1.5mL蒸餾水，-20℃分裝保存4周，避免反復凍融。

產(chǎn)品說明：
ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換，在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成，肝臟損傷導致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD⁺，NADH在340nm處有吸收峰，而NAD⁺沒有；測定340nm 吸光度下降速率，來計算ADH活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
冰、低溫離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

實驗實例：

1. 取0.1g大鼠肝臟按照提取和測定步驟操作，測得計算ΔA空白管=A1-A2=0.558-0.557=0.001，ΔA測定管=A3-A4=0.812-0.587=0.225，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

ADH (U/g 質(zhì)量) =1.61×(ΔA測定管–ΔA空白管)÷W=1.61×(0.225–0.001)÷0.1=3.6064U/g 質(zhì)量。

1. 取小鼠血漿直接檢測，測得計算ΔA空白管=A1-A2=0.558-0.557=0.001，ΔA測定管=A3-A4=0.708-0.676=0.032，按液體體積計算酶活得：

ADH (U/mL) =1.61×(ΔA測定管–ΔA空白管)=1.61×(0.032–0.001)=0.04991 U/mL。
注意事項：

1. 若A3大于1.5或者A3小于A1，則需要將樣本用蒸餾水稀釋再進行測定，計算公式注意乘以稀釋倍數(shù)。

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