土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC0285
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加100 mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存8周；

2. 試劑四：臨用前取1支加576 μL無(wú)水乙醇（自備），24 μL蒸餾水充分溶解。用不完的試劑2-8℃保存一周（變褐色后不能再使用，一瓶即可以實(shí)驗(yàn)100T，為延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間故多給一瓶）；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：0.5 μmol/mL*酚標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：
土壤磷酸酶是一類(lèi)催化土壤有機(jī)磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響，根據(jù)最適pH范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類(lèi)型。

堿性環(huán)境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成*酚和磷酸*二鈉，通過(guò)測(cè)定酚的生成量即可計(jì)算出S-AKP/ALP活性。
 

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、研缽、蒸餾水、30-50目篩、乙醇和甲苯（不允許快遞）。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1. 新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。
2. 稱(chēng)取風(fēng)干混勻土壤約0.1g，加入0.05mL甲苯（自備），輕搖15min；加0.4mL試劑一并且搖勻后，置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱，開(kāi)始計(jì)時(shí)，催化反應(yīng)24h；到時(shí)后迅速加入1mL試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。

10000rpm室溫離心10min，取上清液置于冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取微量比色皿/96孔板，加入10μL試劑一，20μL試劑三，4μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水166μL，混勻后室溫靜置30min，于660nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。（空白管只需要測(cè)定1-2次）

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量比色皿/96孔板，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，20μL試劑三，4μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水166μL，混勻后室溫靜置30min，于660nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。（標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定1-2次）

4. 測(cè)定管：取微量比色皿/96孔板，加入10μL上清液，20μL試劑三，4μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水166μL，混勻后室溫靜置30min，于660nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

三、S-AKP/ALP活性計(jì)算
活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放1nmol酚為1個(gè)酶活單位。
S-AKP/ALP活性（U/g 土樣）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×V總÷W÷T×1000
=725×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；V總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，24 h=1d；1000：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1μmol=1000nmol。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Liu B, Wang S, Wang J, et al. The great potential for phytoremediation of abandoned tailings pond using ectomycorrhizal Pinus sylvestris[J]. Science of The Total Environment, 2020, 719: 137475.

2. Shao T, Zhao J J, Liu A, et al. Effects of soil physicochemical properties on microbial communities in different ecological niches in coastal area[J]. Applied Soil Ecology, 2020: 103486.

參考文獻(xiàn)：

1. Guan S. Soil Enzyme and Its Research Method [M]. Beijing: Science Press, 1982.

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