NADP-蘋果酸酶（NADP-ME）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號: BC1120
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：用時加入20 mL提取液充分溶解備用；

2. 試劑三：用時加入用時每支加1 mL雙蒸水充分溶解備用；

3. 試劑四：用時每支加500 μL雙蒸水充分溶解備用；

4. 工作液：在15 mL試劑二中加入2 mL試劑三和1 mL試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產(chǎn)生*酸和CO₂，以及伴隨NAD(P)⁺的還原反應，是蘋果酸代謝的關鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
NADP-ME催化NADP⁺還原成NADPH，在340nm下測定NADPH增加速率。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

1. 若A2-A1大于0.5，需將樣本用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。

2. 實驗時，試劑三、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一37℃或25℃水浴放置。

3. 比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

4. 最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。

5. 如果ΔA＜0.01，可將反應時間延長到5分鐘或10分鐘。

實驗實例：

1. 取0.1g肝加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清，按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=0.924-0.637=0.287，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

NADP-ME（U/g 質(zhì)量）=4823×ΔA÷W=4823×0.287÷0.1=13842.01 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g蒜加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清，按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=0.171-0.135=0.036，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

NADP-ME（U/g 質(zhì)量）=4823×ΔA÷W=4823×0.036÷0.1=1736.28 U/g 質(zhì)量。
相關發(fā)表文獻：
[1] Baohua Zhu,Ruihao Zhang,Nana Lv,et al. The Role of Malic Enzyme on Promoting Total Lipid and Fatty Acid Production in Phaeodactylum tricornutum. Frontier in Immunology. June 2018;(IF4.716)
參考文獻：
[1] Spampinato C P, Colombo S L, Andreo C S. Interaction of analogues of substrate with NADP-malic enzyme from maize leaves[J]. Photosynthesis research, 1994, 39(1): 67-73.
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