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關(guān)于間充質(zhì)
干細(xì)胞三系誘導(dǎo)染色分析
一、MSC三系誘導(dǎo)基本介紹
干細(xì)胞,又稱(chēng)“萬(wàn)能細(xì)胞",是一種未充分分化、尚不成熟的細(xì)胞,在適當(dāng)條件下,具有再生各種組織、器官的潛能,因此被寄予厚望,干細(xì)胞研究也多次進(jìn)入國(guó)自然研究熱點(diǎn)排行榜。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)具有多向分化的潛能,體外在一定條件下可以誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞,2006年國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)(ISCT)確定此三項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)是MSC鑒定的必檢項(xiàng)目,MSC的三系誘導(dǎo)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域一直深受各位科研人員的青睞和應(yīng)用。
二、MSC三系分化檢測(cè)手段
“成脂分化"
間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化有兩個(gè)階段,先是MSC分化為脂肪前體細(xì)胞,接著在特定的細(xì)胞刺激影響下(如C/EBPs和PPAR-γ)最終分化為脂肪細(xì)胞,出現(xiàn)脂肪細(xì)胞中顯著的標(biāo)志物(脂肪滴)。對(duì)于脂滴染色,經(jīng)常采用油紅O染色方法對(duì)脂滴進(jìn)行染色,其原理為油紅O可進(jìn)入脂滴與其特異性結(jié)合將其染成紅色。我司有多款油紅O染色試劑盒,分別適配于組織和細(xì)胞樣本,用于細(xì)胞染色常推薦G1262,染色后結(jié)果可通過(guò)圖像處理軟件進(jìn)行分析,如果想用于后續(xù)定量分析,可以染色后用無(wú)水異丙醇或乙醇浸泡細(xì)胞3-5min進(jìn)行顏色提取,用離心管收集溶出的溶液,分取1ml稀釋一定倍數(shù)進(jìn)行紫外分光光度法測(cè)量520nm處的OD值。除此之外我們還擁有熒光法試劑盒(內(nèi)含核染料)用于脂滴染色,結(jié)果對(duì)比清晰,染色靈敏。
染色示例
相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 |
G1260 | 飽和油紅O染色液 | 100ml/ 500ml |
G1261 | 改良油紅O染色試劑盒 | 2*50ml/ 2*100ml |
G1262 | 油紅O染色試劑盒 (細(xì)胞專(zhuān)用)HOT | 4*20ml/ 4*50ml |
G1263 | 改良油紅O染色試劑盒 (環(huán)保型) | 4*50ml |
G1264 | 脂質(zhì)熒光染色試劑盒 (尼羅紅法)HOT | 2*50ml |
G1265 | 糊精水溶液(1%) | 100ml |
“成骨分化"
MSC成骨分化分為兩個(gè)時(shí)期,誘導(dǎo)初期會(huì)有堿性磷酸酶(ALP)的高度表達(dá),作為成骨細(xì)胞分化成熟的早期標(biāo)志,可通過(guò)固藍(lán)染色來(lái)鑒別。誘導(dǎo)后期,成熟的成骨細(xì)胞表達(dá)ECM鈣化相關(guān)蛋白,長(zhǎng)時(shí)間的成骨誘導(dǎo)使鈣離子以鈣鹽方式沉淀下來(lái),形成“骨結(jié)節(jié)"。骨結(jié)節(jié)可通過(guò)茜素紅S染色(茜素紅和鈣發(fā)生顯色反應(yīng)),把外面沉積的鈣結(jié)節(jié)染成深紅色,通過(guò)著色物面積和深淺來(lái)表示成骨分化的強(qiáng)弱。
對(duì)于茜素紅染色,我們2024年上新了可以提取鈣鹽染色的輔助試劑-CPC(G1453),以及染色劑+提取劑的試劑盒套裝(G3283),在完成茜素紅染色后,加入提取試劑室溫孵育15-30min使茜素紅染色充分溶解,用離心管收集溶出的溶液,分取100ul或200ul置于96孔板條內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)量560nm處的OD值,從而半定量鈣鹽含量。
染色示例
相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
G1480 | 堿性磷酸酶 染色試劑盒 (偶氮偶聯(lián)法)HOT | 4*2ml/ 4*10ml/ 4*20ml | ALP 染色 |
G1481 | 堿性磷酸酶 染色試劑盒 (改良Gomori鈣鈷法) | 3*50ml | |
G1450 | 茜素紅S染色液 (0.2%,pH8.3) | 100ml/ 500ml | 茜素紅染色 |
G1452 | 茜素紅S染色液 (1%,pH4.2)HOT | 100ml | |
G1453 | 茜素紅S染色 提取試劑 (CPC,10%)HOT | 100ml | |
G3280 | 鈣鹽染色試劑盒 (改良茜素紅S 法) | 3*50ml | |
G3281 | 鈣鹽染色試劑盒 (茜素紅S法) | 2*50ml | |
G3282 | 鈣鹽染色試劑盒 (Von Kossa法) | 2*50ml | |
G3283 | 茜素紅S染色 定量檢測(cè)試劑盒 (CPC法)HOT | 2*20ml/ 2*100ml |
“成軟骨分化"
MSC成軟骨分化可分為兩個(gè)時(shí)期,首先MSC聚集成團(tuán),成團(tuán)的中間細(xì)胞經(jīng)分裂分化轉(zhuǎn)變成一種大而圓的細(xì)胞,即成軟骨細(xì)胞。然后成軟骨細(xì)胞繼續(xù)分化產(chǎn)生基質(zhì)和纖維,不斷交織形成軟骨球狀,可通過(guò)阿利新藍(lán)來(lái)進(jìn)行鑒別染色,阿利新藍(lán)與軟骨基質(zhì)中的多糖結(jié)合,使軟骨細(xì)胞和基質(zhì)呈淺藍(lán)色或藍(lán)綠色。若想對(duì)軟骨含量定量分析,可以使用G1567-阿利新藍(lán)染色提取試劑在阿利新藍(lán)染色后進(jìn)行溶解提取顏色,室溫孵育1-2h即可,用離心管收集溶出的溶液,分取100μL或200μL置于96孔板條內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)量620nm處的OD值,從而達(dá)到半定量軟骨含量目的。
染色示例
相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 |
G1560 | 阿利新藍(lán)染色試劑盒 (pH=2.5)HOT | 3*50ml/ 3*100ml |
G1562 | 阿利新藍(lán)染色液(pH2.5) | 100ml |
G1563 | 阿利新藍(lán)染色試劑盒 (pH=1.0) | 3*50ml |
G1565 | 阿利新藍(lán)染色試劑盒 (細(xì)胞專(zhuān)用) | 2*20ml/ 2*50ml |
G1567 | 阿利新藍(lán)染色提取試劑HOT | 100ml |
G2541 | 軟骨染色試劑盒 (阿利新藍(lán)法,pH1.0) | 2*50ml |
G2542 | 軟骨染色試劑盒 (阿利新藍(lán)法,pH2.5)HOT | 2*50ml |
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