帶電荷的物質在電廠中趨向運動稱為電泳,核酸電泳通常在瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中進行,核酸探針、核酸擴增和序列分析等技術所*的組成部分。那么核酸電泳的原理是什么呢,下面我就就來說一下。
核酸電泳的原理:
1.核酸分子中糖-磷酸骨架中的磷酸基團,呈負離子化狀態(tài);核酸分子在一定的電場強度的電場中,他們會向正電極方向遷移;
2.電泳中使用無反應活性的穩(wěn)定的支持介質,電泳遷移率(或遷移速度)與分子大小、介質粘度等成反比;
因此,可在同一凝膠中、一定電場強度下分離出不用分子量大小或相同分子量但結構型有差異的核酸分子。
瓊脂糖凝膠電泳原理:
瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種線狀高聚物。將瓊脂糖在所需緩沖液中加熱熔化成清澈、透明的溶膠,然后倒入膠模中,凝固后將形成一種固體基質,其密度取決于瓊脂糖的濃度。
將凝膠置電場中,在中性pH值下帶電荷的核酸通過凝膠網孔向陽極遷移,遷移速率受到核酸的分子大小、構象、瓊脂糖濃度、所加電壓、電場、電泳緩沖液、嵌入染料的量等因素影響。在不同條件下電泳適當時間后,大小、構象不同的核酸片段將處在凝膠不同位置上,從而達到分離的目的。瓊脂糖凝膠的分離范圍較廣,用各種濃度的瓊脂糖凝膠可分離長度為200bp50kb的DNA。
聚丙烯酰胺凝膠電泳原理:
聚丙烯酰胺凝膠通過丙烯酰胺單體、鏈聚合催化劑N,N,N’,N’-四甲基乙二胺(TEMED)和過硫酸銨以及交聯劑N,N’-亞甲雙丙烯酰胺之間的化學反應而形成。丙烯酰胺單體在催化劑作用下產生聚合反應形成長鏈,長鏈經交聯劑作用交叉連接形成凝膠,其孔徑由鏈長和交聯度決定。鏈長取決于丙烯酰胺的濃度,調節(jié)丙烯酰胺和交聯劑的濃度比例,可改變聚合物的交聯度。
聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據電泳樣品的電荷、分子大小及形狀的差別達到分離目的,兼具分子篩和靜電效應,分辨力高于瓊脂糖凝膠電泳。可分離只相差1個核苷酸的DNA片段。
聚丙烯酰胺凝膠電泳用于分析和制備長度小于1kb的DNA片段。根據所要分離的核酸片段大小,可制備不同濃度的凝膠。
生物大分子在一定pH條件下,通常帶電荷,將其置于電場中,會以一定的速度向與其電荷性質相反的電極遷移,遷移速度稱電泳速率。電泳速率與電場強度、分子所帶的靜電荷數成正比,與分子與介質的摩擦系數成反比。摩擦系數與分子的大小、構型及介質的粘度有關。以上便是核算電泳的原理了。